Извлекаемый ядерный антиген - Extractable nuclear antigen

Извлекаемые ядерные антигены (ENA) - это более 100 различных растворимых цитоплазматических и ядерных антигенов . Они известны как «экстрагируемые», потому что могут быть удалены из ядер клеток с помощью физиологического раствора и представляют собой шесть основных белков: Ro, La, Sm, RNP, Scl-70, Jo1. Большинство ENA являются частью сплайсосомных или нуклеосомных комплексов и представляют собой тип малого ядерного рибонуклеопротеина (snRNPS). Расположение в ядре и ассоциация со сплайсосомами или нуклеосомами приводит к тому, что эти ENA связаны с дополнительной РНК и белками, такими как полимеразы. Такое качество ENA часто затрудняет очистку и количественную оценку их наличия для клинического использования.

Клинические применения

Извлекаемые ядерного антигена панель , или панель ЕСА, тесты на присутствие аутоантител в крови , которые вступают в реакцию с белками в клеточном ядре. Обычно проводится после положительного теста на антинуклеарные антитела ( ANA ), и в одном из них проявляются симптомы аутоиммунного расстройства . ANA проверяет наличие или отсутствие аутоантител, в то время как панель ENA оценивает, какие белки в ядре клетки распознают аутоантитела. Панель ENA помогает диагностировать, различать и отслеживать прогрессирование аутоиммунных заболеваний и выполняется с помощью простого анализа крови. Хотя уровни аутоантител могут колебаться в течение всей жизни, как только вы разовьете аутоантитела, они будут у вас всегда. Аутоантитела к этим антигенам связаны с определенными заболеваниями соединительной ткани. Действительно, в 84,3% положительных образцов анти-ENA также были обнаружены реагенты ANA. Использование тестов на аутоантитела против ENA может служить дополнительной проверкой аутоиммунного заболевания, потому что одного положительного теста на ANA недостаточно для диагностики. Фактически, низкие уровни ANA могут быть обнаружены у здоровых пациентов. Применение тестов против ENA варьируется от исключения групп пациентов из определенных групп, заболеваний соединительной ткани, до мониторинга активности заболевания. По сути, это позволяет клиницистам исключить определенные аутоиммунные нарушения, если конкретное аутоантитело отсутствует, и позволяет клиницистам отслеживать прогрессирование заболевания, если уровни этих аутоантител увеличиваются или уменьшаются. Чтобы подтвердить наличие анти-ENA, в настоящее время рекомендуется использовать два или более метода для подтверждения анти-ENA, чтобы избежать ложных срабатываний. Диагностика аутоиммунных заболеваний соединительной ткани (CTD) проводится путем анализа клинических симптомов и признаков, а также путем идентификации аутоантител, направленных против ядерных антигенов. В документе 2002 года также делается попытка сравнить диагностические тесты, используемые в иммунологических лабораториях для измерения анти-ENA, и способы улучшения этого тестирования и отчетности. Двойная иммунодиффузия (DID) и противоиммуноэлектрофорез (CIEP), две формы гелевых методов , используются для получения информации о клинической значимости и роли этих антител у пациентов с CTD.

Методы

На гелевой основе

С момента открытия ENA они использовались в качестве диагностического инструмента при заболеваниях соединительной ткани. Два широко используемые методы гель на основе были использованы для определения анти-Енас и их ассоциаций к болезни в начале работы, двойной иммунодиффузии (DID) [1] и встречный иммуноэлектрофорез (CIEP). Оба эти метода требуют осаждения антигенов для получения достоверных результатов. В зависимости от исследуемой anit-ENA один метод может использоваться вместо другого. Например, антиген Scl-70 имеет менее отрицательный заряд, что может привести к тому, что антиген перемещается в том же направлении, что и антитело. Это привело бы к тому, что комплекс антитело-антиген не преципитировал; приводит к недействительным результатам. Кроме того, некоторые антитела против SS-B, обычно идентифицируемые при синдроме Шегрена, могут не обнаруживаться этим методом. Однако этот метод экономически целесообразен и специфичен для подтверждения диагноза. При просмотре данных этих гелевых методов следует учитывать две чувствительности: чувствительность анализа и чувствительность к заболеванию. Чувствительность анализа - это способность распознавать присутствие антител, а чувствительность к заболеванию - это способность распознавать частоту появления антител при заболевании. Из-за ограничений чувствительности к заболеванию гелевых методов были исследованы другие методы, чтобы повысить чувствительность анализа без снижения чувствительности к заболеванию. Например, у пациентов с системной красной волчанкой (СКВ) только 8-40% обнаруживают анти-СМ при использовании анализов на основе геля. Было показано, что CIEP более чувствителен, чем DID.

Гемагглютинация, ELISA, Вестерн-блоттинг

Три дополнительных метода, пассивная гемагглютинация, твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) и вестерн-блоттинг (WB), могут использоваться для идентификации ENA и связывания их с конкретными заболеваниями. Пассивная гемагглютинация была популярна в конце 1970-х годов, но с ее использованием было проведено очень мало исследований, которые ограничивались антителами против Sm и рибонуклеарных белков (RNP). Иммуноферментный анализ (ELISA) стал наиболее широко используемым методом тестирования на анти-ENA из-за простоты выполнения, количественной оценки и большого объема вывода. Хотя этот метод имеет повышенную чувствительность анализа и эффективен для больших лабораторий, он имеет гораздо более низкую специфичность к заболеванию, чем альтернативные методы. Это связано с невозможностью правильно изолировать ENA без больших затрат из-за их ассоциации с комплексами в ядре клетки. Еще одна проблема, связанная с методом ELISA, заключается в том, что у пациентов без СКВ были зарегистрированы антитела против Sm, что привело бы к чрезмерному исследованию, но могло быть связано с качеством используемого источника антигена. Главный недостаток вестерн-блоттинга состоит в том, что антитела, нацеленные против конформационных эпитопов, не могут быть обнаружены. Вдобавок ко всему могут возникать ложноположительные результаты, а специфичность заболевания ниже, чем у других методов. Хотя каждый метод имеет свои преимущества и недостатки, ELISA имеет наименее серьезные недостатки, связанные с возможностью ложноположительных результатов (которые менее опасны, чем ложноотрицательные результаты), и дороговизна.

Многие лаборатории используют комбинацию обоих этих методов для повышения эффективности без ущерба для специфичности. В настоящее время семинары Европейского консенсуса рекомендуют проводить скрининг на наличие положительных анти-ENA с помощью метода ELISA. За этим последует более конкретный тест, такой как CIEP, с образцами, которые определены как положительные.

Шесть основных антигенов, используемых в иммунологических лабораториях для обнаружения, - это Ro , La , Sm , RNP , Scl-70 и Jo1 , которые проверяются методами двойной иммунодиффузии Оухтерлони и подтверждаются иммуноблоттингом . В тестах на антиядерные антитела эти антигены имеют пятнистый узор.

Терминология

Первоначально ENA относились к белкам, содержащимся в солевом экстракте ядер клеток . С тех пор компоненты были идентифицированы более четко и фактически включают множество цитоплазматических молекул. Однако неправильное название осталось. Эти белки тесно связаны с различными молекулами РНК и поэтому называются рибонуклеопротеинами , но номенклатура, используемая для них, часто является источником путаницы, Sm, Ro и La были названы в честь первых двух букв фамилий пациентов, у которых они были. первый нашел. Два белка, связанные с синдромом Шегрена, были независимо описаны как антигены A и B, но теперь известно, что они идентичны Ro и La соответственно. т.е. SS-A = Ro и SS-B = La.

Панельные тесты ENA (экстрагируемый ядерный антиген), тест на наличие аутоантител к белкам в ядре клетки. Термин «экстрагируемый» происходит от способности удалять аутоантитела из ядер с помощью физиологического раствора и обычных белков. Метод идентификации этих образцов является причиной того, что их также называют антителами к антигенам, экстрагированным физиологическим раствором.

ENA

Anti-ENA - это группа антител, часто используемая для скрининга смешанного заболевания соединительной ткани (MCTD), синдрома Шегрена и системной красной волчанки, и обычно состоит из шести тестов:

  • анти-Sm (для СКВ)
  • анти-RNP (для MCTD)
  • анти-Ла / анти-СС-Б (для Шегрена)
  • анти-Ro / анти-SS-A (для Sjögren's)
  • anti-Scl70 (от склеродермии)
  • анти-Джо (при дерматомиозите)

Чувствительность и специфичность этих тестов зависит от типа используемого анализа и, следовательно, будет зависеть от лаборатории. В следующей таблице показана чувствительность и специфичность антител ENA при обнаружении СКВ с помощью метода ELISA.

Антитело (проверено с помощью ELISA) Чувствительность (%) для СКВ Специфичность (%) для СКВ
Анти-Ро (SS-A) 61 80-93
Анти-Ла (СС-Б) 27-35 88-97
Анти-См 34-45 88-100
Анти-РНП 39–64 84-97
Ссылка для всех значений:

Кроме того, тестирование ENA также использовалось для изучения заболеваний, связанных с пшеницей, таких как глютеновая болезнь . В исследовании, проведенном в 2018 году, был проведен скрининг пациентов с заболеваниями, связанными с пшеницей, на наличие 10 антител против ENA.

  • SSA (Ro)
  • SSB (Ла)
  • RNP / Sm
  • Jo-1
  • См
  • Scl-70
  • Хроматин
  • Центромера
  • Гистон
  • РНК-полимераза III

73% пациентов с глютеновой болезнью дали положительный результат на антигистоновые препараты, и эта болезнь была наиболее распространенной, что обычно связано с лекарственной красной волчанкой . Это означает высокую вероятность аутоиммунного заболевания у пациентов с заболеваниями, связанными с пшеницей.

использованная литература

внешние ссылки